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***准备

1. 非乙酰化cAMP标准品

将5000 pmol/mL cAMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管，400μL到#2至#6号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#6管。

经以上操作，#1至#6管中cAMP标准品浓度分别为250,50，10,2,0.4和0.08 pmol/mL（详见cAMP实验稀释详情键盘纸）。稀释过的标准品需在30分钟内使用。

标记一只试管作为无标准品空白对照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

2. 洗涤液

将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至***盒有效期限，或者3个月。

ELISA的基础是抗原或抗l体的固相化及抗原或抗l体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗l体仍保持其免l疫学活性，酶标记的抗原或抗l体既保留其免l疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗l体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗l体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗l体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗l体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免l疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗l体。然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。




包括以下步骤：1)抗原表位的计算机筛选；2)抗原的制备；3)血l清的采集；4)间接ELISA方法的建立；5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证；6)***盒的稳定性验证；7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出感l染猪的戊型肝l炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝l病毒的流行和阻断戊肝l病毒由猪向人传播。