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***准备

1. 非乙酰化cAMP标准品

将5000 pmol/mL cAMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管，400μL到#2至#6号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#6管。

经以上操作，#1至#6管中cAMP标准品浓度分别为250,50，10,2,0.4和0.08 pmol/mL（详见cAMP实验稀释详情键盘纸）。稀释过的标准品需在30分钟内使用。

标记一只试管作为无标准品空白对照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

2. 洗涤液

将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至***盒有效期限，或者3个月。

线性关系

cAMP浓度为16.0pmol/mL的样品，用0.1M HCl进行连续七次1:2梯度稀释。将实际的cAMP浓度和测定的cAMP浓度绘制图表。该直线的斜率为1.000，相关系数为0.999。

交叉反应

部分相关化合物的交叉反应由竞争ELISA测定。将可能的交叉反应物溶解到***盒分析缓冲液中，浓度从500pmol/mL至500,000pmol/mL。这些样品通过乙酰化在cAMP竞争分析中被测定，通过比较样品中交叉***的实际浓度，可以计算出交叉反应，并用百分比(%)表示。

包被抗l体（或抗原）的选择：将抗l体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的较适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值较大而蛋白量较少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。