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本***盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP的水平。简而言之，将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上，细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP与固定数量的偶联辣根过氧化物酶的cAMP或碱性磷酸酶竞争性的结合抗cAMP单克l隆抗l体，已知的cAMP作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育，洗掉所有***，加入底物进行显色。将多孔板置于酶标l仪上，于450nm或405nm波长下，进行读数。***的光强度与样品中cAMP的浓度呈反比关系。基于cAMP标准品所得曲线，通过测得的光密度可以计算出样品中cAMP的浓度。

对于生长的***培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和***裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。

线性关系

cAMP浓度为16.0pmol/mL的样品，用0.1M HCl进行连续七次1:2梯度稀释。将实际的cAMP浓度和测定的cAMP浓度绘制图表。该直线的斜率为1.000，相关系数为0.999。

交叉反应

部分相关化合物的交叉反应由竞争ELISA测定。将可能的交叉反应物溶解到***盒分析缓冲液中，浓度从500pmol/mL至500,000pmol/mL。这些样品通过乙酰化在cAMP竞争分析中被测定，通过比较样品中交叉***的实际浓度，可以计算出交叉反应，并用百分比(%)表示。

通过鸟苷酸环化酶可以实现GTP转化为cGMP。在哺乳动物中，存在2种类型的鸟苷酸环化酶:可溶性及膜结合的鸟苷酸 环化酶(8,10,11)。可溶性环化酶在一氧化氮与血红素辅基结合后，即被激l活。七层膜结合鸟苷酸环化酶（即跨膜鸟苷酸环化酶或鸟苷酸环化酶微粒）已被证实存在于人类***组中，鸟苷酸环化酶A和B是利l尿钠肽受体，鸟苷酸环化酶C能被热稳定***肠毒l素、鸟苷素和脲激l活。跨膜鸟苷酸环化酶的活性亦受胞内信号通路的其他受体信号所调控。