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发布时间：2022-03-26 08:22:25
结果计算
样品中cAMP浓度有多种计算方法。X轴表示cAMP标准品浓度，Y轴表示净光密度的平均值或者百分比值。
1 样品和标准品的净光密度(OD)平均值的计算：
净OD平均值 = OD平均值 － NSB孔OD平均值
2 计算不同梯度浓度标准品的结合率占较大结合率(B0孔)的百分比，计算公式 如下：
百分比值 = (净OD平均值/ B0孔OD平均值)×100
3 绘制净OD平均值或百分比值对cAMP标准品浓度的Logit-Log曲线。通过插值即可得到样品中cAMP浓度。
因此为筛选出腺苷酸环化酶的激l活剂或磷酸二酯酶的抑制l剂，需要一个高敏感度、特异性的、可重复的方案用于检测cGMP的含量。考虑到大分子的化合物可能存在较弱的影响，这一个初筛是有必要的。
目前商业化提供的一些cGMP检测试剂盒主要使用的是非亲和纯化的cGMP多克l隆抗l体。尽管据称有特异性，但这些多克l隆抗cGMP抗l体与cAMP和GTP呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中，cGMP含量低于cAMP 100倍。
免l疫测定技术的基础在于抗原抗l体之间的特异结合反应，所以任何好的诊断l试剂离不开好的原料，如抗原抗l体，酶等。以前用于免l疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗l体则为纯化抗原免l疫动物后获得的多克l隆抗l体和使用杂交瘤技术得到的单克l隆抗l体，而抗原或抗l体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗l体及其酶结合物等免l疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。
包被抗l体（或抗原）的选择：将抗l体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的较适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值较大而蛋白量较少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
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