IP-WB活性检测***盒服务至上 武汉纽斯特生物

当前没有直接测定法来测量Arl1 GTPases的激l活。

NewEast Biosciences Arl1激l活检测***盒基于特定于配置的单克l隆抗l体，该抗l体特异性识别Arl1-GTP，但不能识别Arl1-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力，可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果，并具有一致的可重复性。

***制备

1X Assay/Lysis Buffer：实验前用去离子水将5X的Assay/Lysis缓冲液稀释成1X的缓冲液，并在使用前加入蛋白酶***l剂如1 mM PMSF, 10 μg/mL leupeptin（亮肽素），或 10 μg/mL aprotinin（抑肽酶）。

样品处理

贴壁细胞

1. 培养细胞密度达到大约80%-90%之间（直径10 cm培养皿，~107个细胞），并用活性剂或***l剂进行处理。

2. 吸去培养基并用冰冷的PBS洗涤两次。

3. 向细胞中加入1X Assay/Lysis缓冲液（每个直径10cm的***培养皿中加入0.5-1mL）。

4. 将培养皿放置于冰上处理10-20分钟。

5. 用细胞刮棒把细胞从培养皿下分离下来。

6. 将细胞裂解物转入合适的管中并放置于冰上。

7. 如果核发生裂解，细胞裂解物可能会变得非常的粘稠并且难以吸取。当这种情况出现时，将细胞裂解物用27?的***l器针头来回吸取3-4次，以******组DNA，从而避免上述情况的出现。

8. 4°C 12000 g, 离心10 min。

9. 收集上清（~1-2 mg总蛋白）并放置于冰上使用。如果样品不立即使用，请将处理后的样品存放于-70°C条件下。

武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往各地。

所需但未提供的材料

1.刺激的和非刺激的细胞裂解液

2.蛋白酶***l剂

3. 4°C管摇杆或摇床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化镁

6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M N***，0.05％

    吐温20）

9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ECL检测***

***准备

?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 就在

用法中，添加蛋白酶***l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。

目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活检测***盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP，但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于克l隆抗l体对其抗原，活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠，重现性一致。