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 1.抗活性的Arl1，小鼠单克l隆抗l体（货号26924）：一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL（1mg / ml），含有50％甘油和0.05％叠氮l化钠。该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arl1-GTP。

2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。

3. 5X测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mM N***，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。

4.抗Arl1，小鼠单克l隆抗l体（目录号26056）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）

pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。

5. 100 XGTPγS（货号30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγSGTP标记的0.5 mL细胞裂解物。

6. 100 X GDP（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP

GDP标记的0.5 mL细胞裂解物。

1.刺激的和非刺激的细胞裂解液

2.蛋白酶***l剂

3. 4°C管摇杆或摇床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化镁

6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M N***，0.05％Tween-20）

9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ECL检测***

?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 在使用前，添加蛋白酶***l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。

Arl3（类似Arf的3）是一种ADP-核糖基化因子（Arf）家族蛋白，在N端延伸方面不同于大多数Arf家族成员。 Arl3的核苷酸交换是快速的，并且与脂质和去污剂无关。 与GDT / GTP结合后，Arl3与一系列效应蛋白相互作用，并调节这些效应蛋白的活性，例如人类视网l膜***4（HRG4），cGMP磷酸二酯酶的δ亚基（PDEδ）和Arl2的结合物（BART）。 Arl3还以可调节的方式结合微管，以通过与色素性视网l膜炎2（RP2）相互作用来改变胞质分裂的特定方面。 有人提出，RP2与Arl3协同作用，将光感受器中的细胞膜和细胞骨架连接为细胞的一部分

9.收集上清液并在冰上存储样品（约1-2 mg总蛋白）以进行中间使用，或将其冷冻并保存在-70°C下以备将来使用。

体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cd***2被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cd***2被激l活。

1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cd***2蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。

2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。

3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。

4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。

5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。